定音器的使用方法主要取決於定音器的類型，以下是兩種常見定音器的使用步驟：
電子定音器。先按響定音器，然後調整吉他的綠弦（A弦），儘量使其音高與定音器的音高一致。完成綠弦的調整後，根據五度關係調整上方的Mi弦或下方的Re弦。接著，根據八度關係調整上方的Re弦和下方的Mi弦。繼續使用五度和八度關係調整其他弦，直至所有弦的音高與定音器相符。
傳統定音器。在一個安靜的房間內，吹響對應於吉他1弦到6弦的音高。例如，如果吹奏的是吉他上1弦對應的音高E，就慢慢調整1弦的音高，直到它與定音器中1弦的音高相同。然後按照同樣的方法調整其他弦。
此外，如果對五度和八度的聽覺印象不夠好，可以使用帶有音高指示的定音器。在使用定音器時，應保持謹慎，因為過度依賴定音器可能會導致聽覺訓練不足。調音器只是一個輔助工具，最終還是需要依靠耳朵來判斷音準。