可以通過以下方式分辨蟻后：
觀察體型。對於許多品種的螞蟻來說，蟻后通常比工蟻體型要大得多，尤其是胸部明顯更大，是蟻羣中體型最大的個體。
檢查是否有翅膀。許多螞蟻品種的蟻后天生就有翅膀，這些翅膀會在某個生命階段脫落，觀察螞蟻身體中間部分是否有從身體兩側突出的小疙瘩，這可能是原來長翅膀的地方。
檢查胸節。蟻后的胸節比工蟻的大得多，也顯得更笨重，因爲要支撐原來的翅膀。
考慮發現螞蟻的環境。蟻后通常位於蟻窩的中間位置，喜歡潮溼的環境，特別是在腐爛的木頭裏。
考慮螞蟻的種類。某些特定品種的螞蟻（如軍蟻）的蟻后體型與工蟻體型差異不大，這使得辨認更加困難。
諮詢專家。如果無法自行確定，可以諮詢專業的滅蟻人員。