使用手套箱的方法因手套箱的類型和用途而異，但通常包括以下幾個基本步驟：
打開外門，放入實驗物品，然後關好外門。
抽真空至特定壓力，通常為-0.1MPa，然後關閉真空閥和真空泵。
通入氮氣或其他惰性氣體至壓力表值為0，然後關閉充氣閥。
重複抽真空和充氣過程數次，以確保手套箱內部達到所需的氣體環境。
打開手套口密封蓋，逆時針旋轉打開內門，將實驗物品轉移至主體箱內，完成實驗操作後，關閉內門，清理主體箱。
實驗完畢後，打開內門，清理主體箱，將物品轉移到過渡室，關閉內門，打開外門取出物品，再次關閉外門，並加蓋密封手套口。
此外，在使用過程中，需注意環境清潔、設備清潔、記錄水氧含量、檢查氣體壓力、及時更換氣體容器、注意操作時不要使用可能刺破手套的尖銳物品等。具體步驟可能因手套箱的型號和製造商而有所不同，建議參考具體的使用手冊或指南。