手性拆分方法主要包括以下幾種：
手性衍生化法（CDR）。這種方法涉及將光學活性藥物與手性試劑在柱前進行衍生化，形成共價結合的非對映體。這些非對映體由於與固定相之間的鍵合力不同，會產生差速遷移並被分離。CDR的優點在於可以使用非手性固定相，節省成本，並且通過選擇具有強烈發色團或螢光的手性試劑，可以提高檢測能力。然而，這種方法要求手性試劑具有高的光學純度，且各對映體的衍生化速率和平衡常數應一致。
手性流動相添加法（CMPA）。在這個方法中，手性試劑被加入到LC流動相中，與手性藥物生成可逆的非對映體複合物。這些複合物根據穩定性、在流動相中的溶解性和與固定相的鍵合力差異，在非手性固定相上被分離。CMPA有配合交換、離子對色譜和包含色譜三種套用形式。
手性固定相法（CSP）。這是一種直接法，利用手性環境在固定相中直接分離對映體。這種方法不需要衍生化步驟，適用於多種類型的藥物。
除了上述方法外，還有基於酶或生物的方法、氣相色譜法和毛細管電泳法等用於手性拆分。每種方法都有其優勢和局限性，適用於不同類型的藥物和具體套用場景。