DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種具有以下作用的螢光染料:
DNA染色:DAPI能夠穿透細胞膜並與細胞核中的雙鏈DNA結合,形成螢光複合物。這種結合使得DAPI對DNA的染色靈敏度遠高於EB(溴化乙啶)。DAPI染色後,在螢光顯微鏡下可以觀察到發出藍色螢光的細胞。
活細胞和固定細胞染色:DAPI不僅可以用於固定細胞的染色,也能用於活細胞的染色,儘管活細胞染色對DAPI濃度有嚴格要求。它能夠快速進入活細胞中與DNA結合,因此在生物學研究中被廣泛套用。
螢光顯微鏡觀測:DAPI與DNA結合時產生的強螢光使其成為螢光顯微鏡技術中DNA染色的理想選擇。在螢光顯微鏡下,DAPI染劑在358nm(紫外線)處有一個最大吸收峰,並在461nm(藍)處有一個最大發射峰,其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色,因此在螢光顯微技術中DAPI被紫外線照亮且被藍或青色濾鏡檢出。
流式細胞術套用:DAPI可用於流式細胞術中作為DNA染料,幫助定量給細胞中的DNA染色。這一套用有助於研究細胞周期、細胞凋亡等生物學過程。
特定情況下的套用:DAPI也常用於普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色,如細胞凋亡檢測。染色後,可以使用螢光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。
需要注意的是,DAPI對生物體而言被視為一種毒性物質與致癌物,儘管在MSDS中它被標記為無毒。此外,由於DAPI可以摻入DNA螺旋中,它可能具有底層的DNA誘變性,因此應小心配置和使用DAPI。