酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,簡稱ELISA)是一種廣泛套用於生物醫學研究和臨床診斷的免疫分析技術。其基本原理如下:
將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(如聚苯乙烯微量反應板)表面,同時保持其免疫活性。
將酶(如辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶)標記的抗原或抗體與固相上的抗原或抗體結合,形成酶標抗原或酶標抗體複合物。這種複合物既保留了免疫活性,也保留了酶的活性。
在反應體系中加入待測樣品(含有待測抗體或抗原)和酶標抗原或抗體,讓它們與固相載體上的抗原或抗體結合,形成免疫複合物。
反應完成後,通過洗滌去除未結合的游離成分,只留下與固相載體結合的免疫複合物。
加入酶反應的底物,底物在酶的作用下轉化為有色產物。產物的量與標本中待檢物質的量成正比。
通過定性或定量分析有色產物的量,來確定樣品中待測物質的含量。
ELISA技術具有高靈敏度、高特異性和較短的分析時間等優點,可用於檢測各種抗原、抗體,以及疾病臨床診斷、食品中有害成分殘留的測定等。常見的ELISA方法包括雙抗體夾心法、間接法、競爭法等,適用於不同類型抗原和抗體的檢測。