高效液相色譜(HPLC)的分析流程通常包括以下步驟：
準備流動相。對抽濾後的流動相進行超聲脫氣處理，時間約為10~20分鐘。
打開HPLC工作站。連線好流動相管道和檢測系統，包括計算機軟體和色譜儀。
沖洗系統。若長時間未使用或更換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥，沖洗時間不宜超過10ml/min。
設定流量。初次使用新的流動相時，可以測試系統壓力，但流速一般不超過2000。
走基線觀察。調節流量後，走基線觀察基線情況，這有助於評估系統的穩定性和流動相的適用性。
設計走樣方法。選擇合適的配件，如進樣閥、泵、檢測器等，並設定走樣方法，包括進樣前的穩流、基線歸零、進樣閥轉換和走樣時間。
進樣和操作。根據設定的方法進行進樣，記錄數據和標記。進樣後，再次走基線以清洗系統。
關機。分析完成後，先關閉計算機，再關閉液相色譜儀。
記錄和清理。填寫使用登記本，由負責人簽字。清理實驗室，確保設備安全存放。
此外，HPLC的分離過程涉及樣品通過色譜柱的分離，其中不同組分根據其在流動相和固定相之間的分配係數、親和力、吸附力或分子大小的不同而先後流出色譜柱達到分離的目的。常用的檢測器包括紫外吸收檢測器等，用於捕捉並記錄各組分的信號。