LDH(乳酸脫氫酶)法細胞毒性檢測的原理基於以下幾點:
LDH的存在與釋放:
LDH是一種穩定的胞漿酶,主要存在於正常細胞的胞質中。在細胞膜未受損的情況下,LDH不能通過細胞膜釋放到細胞外。
當細胞受損或死亡時,細胞膜的完整性被破壞,導致LDH釋放到細胞外。
LDH活性檢測:
通過檢測細胞培養上清中LDH的活性,可以判斷細胞受損的程度。LDH催化乳酸形成丙酮酸鹽,這一過程伴隨著還原型輔酶I(NADH)的生成。
在LDH的作用下,NAD+被還原生成NADH,這一反應可以通過酶標儀在340nm波長下檢測吸光度的增加速率,從而間接測定LDH活性。
LDH與INT的反應:
LDH與INT(四唑鹽類)反應,可以形成紅色的甲臢化合物。甲臢的量與裂解(死亡)的細胞數成正比,在490nm波長下產生吸收峰,通過比色法可以檢測LDH活性。
實驗套用:
LDH法不僅用於細胞毒性檢測,還可以用於測量細胞膜的完整性,評估細胞增殖能力和細胞生存能力。
該方法操作簡便、快速,適用於CTL和NK細胞活性測定及藥物、化學物質或放射所引起的細胞毒性研究。
綜上所述,LDH法通過檢測細胞培養上清中LDH的活性和與INT的反應,可以有效地評估細胞受損程度和細胞毒性的影響。