Tm值是衡量DNA或RNA在特定溫度下穩定性的一箇重要指標，即DNA雙螺旋結構在熱變性過程中紫外吸收值達到最大值的1/2時的溫度。不同序列的DNA或RNA，其Tm值不同，通常，DNA中G-C含量越高，Tm值越高，兩者之間呈正比關係。以下是不同情況下Tm值的計算方法：
對於長度爲25mer以下的引物，Tm的計算公式爲Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)。
對於更長的寡聚核苷酸，Tm的計算公式爲Tm=81.5+16.6×Log10[Na+] + 0.41(%GC) - 600/size，其中Size是引物的長度。
以上計算方法可以幫助科學家在設計引物或DNA序列時，選擇最佳的Tm值以確保其穩定性和有效性。