WB灰度分析是一種圖像分析技術，主要用於量化Western blot實驗中蛋白質條帶的強度。這種分析通常涉及以下步驟：
圖像獲取與導入。使用Image J軟體打開Western blot條帶圖像。
圖像預處理。將彩色圖像轉換為8位灰度圖像，以簡化顏色分析；使用「Subtract Background」功能消除背景噪聲，這一步驟中，一般將滾動球半徑設為50，並選擇「Light background」選項。
設定測量參數。通過「Set Measurements」功能設定要分析的參數，這通常包括區域面積、平均灰度值、最小和最大灰度值以及集成密度等。
設定單位。在「Set Scale」功能中設定單位，通常以像素為單位長度。
亮度轉換。使用「Invert」功能將圖像轉換為亮帶模式，使條帶與背景形成對比。
選擇條帶。使用工具列中的選擇工具（如矩形選框或圓形工具）手動選擇要分析的每個蛋白質條帶。
數據分析。使用「Measure」功能開始分析選中的條帶，這將提供每個條帶的詳細灰度值信息。
數據導出。完成所有條帶的分析後，可以將數據導出到Excel表格中，以便進一步分析。
歸一化處理。為了比較不同樣品或實驗條件下的蛋白質表達水平，通常需要將灰度值歸一化。這通常涉及將目標蛋白質的灰度值與內參蛋白質（如GAPDH或β-actin）的灰度值進行比較，以計算相對表達水平。