性別決定是指有性繁殖生物中，決定雌雄性別分化的機制。
性別決定主要涉及性染色體的作用。在大多數生物中，包括人類，性別決定主要由性染色體決定。人類的性別染色體有兩種：X和Y染色體。女性擁有兩個X染色體（XX），而男性擁有一箇X和一箇Y染色體（XY）。在男性精子的形成過程中，會產生含有X或Y染色體的精子，如果含有Y染色體的精子與女性的X染色體結合，形成的受精卵則爲男性（XY）；如果兩個X染色體結合，則形成的受精卵爲女性（XX）。
此外，某些生物的性別決定機制可能更爲複雜，可能受到環境因素或其他遺傳因素的影響。詳情請諮詢專業醫師。