引物Tm，即引物熔化溫度，是指在特定條件下（如特定的鹽濃度、pH值和溫度）引物與模板DNA形成雙鏈結構的溫度。Tm值對於保證引物與模板DNA的特異性結合至關重要，合適的Tm值範圍一般在55℃到60℃之間，這樣可以避免非特異性結合。
計算引物的Tm值需要考慮多個因素，包括G-C含量、鏈長度、鹽濃度和溫度等。其中，G-C含量較高的DNA序列具有較高的Tm值，因為G-C鹼基對之間的氫鍵數量比A-T鹼基對之間的氫鍵數量多。此外，鏈長度越長，Tm值也越高。
對於長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃ (G + C)+ 2℃ (A + T)。對於更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) - 600/size。
總的來說，引物設計是基因擴增中的重要環節，而其中Tm值要求是其中一個重要的原則。在設計引物時，需要計算Tm值，並確保其在合適的範圍內，同時還需要注意其他因素，如引物長度、鹼基配對、GC含量和引物二聚體等。通過合理的引物設計，可以保證基因擴增的特異性和效率。