蛋白質印跡法，也稱為Western Blot（WB），是一種用於檢測細胞或組織提取物中蛋白質表達水平的方法。它通過以下步驟來實現：
提取總蛋白質：首先從組織、細胞或體液等生物樣本中提取總蛋白質，注意避免蛋白質的降解和失活。
分離蛋白質：使用聚丙烯醯胺凝膠電泳將提取的蛋白質進行分離，不同相對分子質量的蛋白質被分離，這需要最佳化電泳條件。
轉移蛋白質：將分離後的蛋白質轉移到硝酸纖維素膜或其他固相載體上，以便與特異性抗體結合。
免疫反應：目標蛋白作為抗原與相應的第一抗體特異性結合，隨後酶或同位素標記的第二抗體與第一抗體結合，形成抗原抗體複合物。
檢測：使用適當的標記物（如螢光染料、化學發光劑等）對抗原抗體複合物進行檢測，確定目標蛋白的存在及相對濃度。
結果分析：對免疫印跡法的結果進行定量分析和比較，以確定目標蛋白的相對濃度及表達情況。
蛋白質印跡法的優點包括靈敏度高、特異性高和可定量，它被廣泛套用於生物醫學研究、藥物開發和臨床診斷等領域。實驗中需要注意的事項包括轉膜前的凝膠浸泡平衡、轉膜液的配置和氣泡的排除、以及轉膜過程中的溫度控制等。