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cetsa原理

細胞熱遷移分析(CETSA)是一種用於研究細胞或組織中配體與蛋白質結合的生物學技術。其工作原理主要如下:

當靶蛋白與藥物分子結合時,這種結合通常會使得靶蛋白變得更加穩定,不容易發生熱變性。

通過在細胞裂解液、細胞內或組織中加熱,蛋白質會因為受熱而發生變性並沉澱析出。

配體結合會影響蛋白質的熱穩定性,導致蛋白質熱熔曲線的右移,即在相同溫度下,未降解的蛋白質量增加。

利用這種特性,可以通過離心去除加熱變性沉澱的蛋白,然後通過蛋白免疫印跡法(Western Blot)或其他蛋白檢測技術檢測上清液內的蛋白,從而獲知與該藥物結合的蛋白譜,研究藥靶相互作用及相應脫靶蛋白。

此外,CETSA技術還可以結合高解析度蛋白質質譜(CETSA MS)在蛋白質組水平識別小分子靶標。這種技術在藥物靶標驗證、臨床藥物靶標發現、脫靶識別以及生物代謝物、核酸及蛋白質相互作用的分析中具有廣泛的套用。