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dab染色法原理

DAB染色法,也稱為二氨基聯苯胺法,是一種用於檢測細胞中過氧化物酶活性部位的方法。其原理在於細胞顆粒中的過氧化物酶能夠催化過氧化氫中的氧釋放出來,進而氧化DAB(3,3'-二氨基聯苯胺),形成金黃色或棕褐色的沉澱物,這些沉澱物定位於過氧化物酶活性的部位。DAB作為HRP(辣根過氧化物酶)的常用顯色底物,在過氧化氫的存在下失去電子,顏色迅速改變,通過聚合等反應生成不溶性有色顆粒,並就地原位沉澱。顯色反應可以表示為:HRP + H2O2 + DAB(電子供體) → HRP + H2O + 氧化型DAB↓。DAB顯色液主要用於過氧化物酶法,其終產物可直接在普通環境下觀察。

此外,DAB染色法也用於細胞凋亡的檢測,其中染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂產生的粘性3'-OH末端在TdT(脫氧核糖核苷酸末端轉移酶)的作用下標記上脫氧核糖核苷酸和螢光素、過氧化物酶等衍生物,然後通過HRP催化DAB產生顏色反應,從而標記出產生DNA斷裂的凋亡細胞。這種方法被稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL)。