柱層析是一種常用的分離和純化技術，其作用主要包括：
分離混合物。利用不同成分在固定相上的吸附能力差異，實現混合物中各組分的分離。極性大的物質容易被固定相吸附，而極性小的物質不易被吸附。這個過程涉及吸附、解吸、再吸附和再解吸的反覆過程。
提純混合物。通過柱層析，可以分離和提取混合物中的特定組分，從而得到較純淨的物質。
分析和鑑定組分。分離後的組分可以通過紫外-可見光譜、螢光分析、質譜等檢測方法進行進一步的分析和鑑定。
製備樣品。柱層析可用於製備一定量的目標物質，供後續實驗和分析使用。
柱層析在生物化學、製藥、食品科學等領域有廣泛套用，例如在蛋白質、DNA和糖蛋白的純化，以及藥物製備和毒素去除等方面。