DTNB法，即二硫代硝基苯甲酸酯法，是一種用於檢測和定量生物樣本中總巰基含量的方法。該方法具有高靈敏度、操作簡單和結果穩定等優點，已被廣泛套用於生物學、醫學和藥學等多個領域。其基本原理是二硫代硝基苯甲酸酯與巰基化合物在鹼性條件下發生反應，生成有色產物。該有色產物在412納米波長下具有最大的吸收值，因此可以通過測量其吸光度值來確定巰基化合物的濃度。
具體操作步驟如下：
樣品處理。首先需要對生物樣本進行處理，以釋放出其中的巰基化合物。常見的處理方法包括超音波破碎、勻漿和離心等。
製備標準曲線。接著，通過向不同濃度的巰基化合物標準液中加入DTNB試劑，生成有色產物並測量其吸光度值，從而繪製出標準曲線。
測定樣品。然後對處理過的生物樣本進行測量，將其加入到DTNB試劑中，生成有色產物並進行吸光度值的測量。通過對比標準曲線，可算出樣本中的總巰基含量。
DTNB法的優點如下：
靈敏度高。可以在低濃度的巰基化合物情況下進行檢測。
操作簡單。無需複雜儀器即可套用。
結果穩定。生成的有色產物穩定性較好，測定結果重現性好。
在使用DTNB法進行檢測時，需要注意以下幾點：
DTNB試劑容易受到光線的影響，應避免陽光直射。
儘量減少樣品處理過程中的巰基化合物損失。
可能需要根據不同生物樣本中的巰基化合物類型及其濃度調整實驗條件。
確保使用正確的試劑和儀器以提高測定結果的準確性。
操作過程中需注意安全，如佩戴手套以防皮膚接觸DTNB試劑。